Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh masa kerja, motivasi dan lingkungan kerja terhadap kinerja karyawan di Universitas Muhammadiyah Jember. Teknik pengumpulan data menggunakan observasi, wawancara dan kuesioner terhadap 64 responden dengan teknik slovin. Alat analisis yang digunakan dalam penelitian ini yaitu uji validitas, uji reliabilitas, uji asumsi klasik, analisis regresi linier berganda, uji T, uji F dan uji R2. Hasil pengujian hipotesis pertama (H1) menunjukan bahwa ada pengaruh yang signifikan antara masa kerja terhadap kinerja karyawan dengan tingkat signifikasi sebesar 0,000 (p<0,05) untuk hipotesis kedua (H2) menunjukan bahwa ada pengaruh yang signifikan antara motivasi terhadap kinerja karyawan dengan tingkat signifikasi sebesar 0,000 (p<0,05)untuk hipotesis ketiga (H3) menunjukan bahwa ada pengaruh yang signifikan antara lingkungan kerja terhadap kinerja karyawan dengan tingkat signifikasi sebesar 0,000 (p<0,05), sedangkan untuk hasil pengujian secara simultan menunjukan hasil yang signifikan sebesar 0,000. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa variabel bebas (X1, X2, X3) secara bersama-sama berpengaruh terhadap variabel terikat (Y) kinerja karyawan di Universitas Muhammadiyah Jember