Penyakit Vascular Streak Dieback (VSD) yang disebabkan oleh Oncobasidium theobromae merupakan salah satu kendala utama pada budidaya kakao. Penelitian ini bertujuan
untuk mengarakterisasi isolat bakteri rizosfer mentimun dan mengevaluasi potensinya dalam
menghambat pertumbuhan O. theobromae secara in vitro. Penelitian dilaksanakan pada
Januari–Juli 2026 di Laboratorium Mikrobiologi Program Studi Agroteknologi Universitas
Muhammadiyah Jember. Isolat diperoleh dari tanah rizosfer mentimun sehat, kemudian
dimurnikan, dikarakterisasi secara morfologi, fisiologis, dan biokimia, serta diuji
antagonismenya menggunakan metode kultur ganda. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
kelima isolat mampu menghambat pertumbuhan O. theobromae dengan daya hambat 32,20%
44,83%, dan isolat T5 menunjukkan daya hambat tertinggi sebesar 44,83%. Seluruh isolat
bersifat Gram positif dan katalase positif, sedangkan hanya isolat T1 yang menunjukkan reaksi
oksidase positif. Aktivitas kitinase tidak terdeteksi pada seluruh isolat, namun isolat mampu
tumbuh pada rentang suhu, pH, dan salinitas yang cukup luas. Hasil penelitian menunjukkan
bahwa bakteri rizosfer mentimun berpotensi dikembangkan sebagai agens pengendali hayati
terhadap O. theobromae