Keberadaan Warung Madura 24 Jam di Kelurahan Sumbersari berkembang pesat karena mampu memenuhi kebutuhan masyarakat selama dua puluh empat jam melalui sistem operasional yang fleksibel, penyediaan barang kebutuhan sehari-hari yang lengkap, serta pelayanan yang berkesinambungan. Kondisi tersebut menjadikan Warung Madura sebagai salah satu bentuk usaha yang memiliki peran penting dalam memenuhi kebutuhan masyarakat sehingga menarik untuk dikaji berdasarkan perspektif nilai-nilai ekonomi Islam menurut Yusuf Al-Qaradawi. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis praktik usaha Warung Madura 24 Jam serta implementasi nilai-nilai ekonomi Islam dalam aktivitas usahanya di Kelurahan Sumbersari Kecamatan Sumbersari Jember. Penelitian ini menggunakan pendekatan kualitatif dengan jenis penelitian studi kasus. Teknik pengumpulan data dilakukan melalui observasi, wawancara, dan dokumentasi dengan informan yang terdiri atas 11 pemilik Warung Madura, 4 penjaga warung, dan 3 konsumen. Analisis data dilakukan melalui tahapan pengumpulan data, kondensasi data, penyajian data, serta penarikan kesimpulan dan verifikasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa praktik usaha Warung Madura 24 Jam dijalankan melalui sistem operasional bergilir selama 24 jam, penyediaan kebutuhan sehari-hari yang lengkap, pelayanan yang fleksibel, serta penetapan harga yang menyesuaikan kondisi pasar. Berdasarkan perspektif nilai-nilai ekonomi Islam menurut Yusuf Al- Qaradawi, praktik usaha tersebut telah mencerminkan implementasi ekonomi ilahiyah (rabbaniyyah) melalui upaya menjalankan usaha sesuai dengan ketentuan syariat dan memperoleh rezeki yang halal; ekonomi moral (akhlaqiyyah) melalui penerapan kejujuran, amanah, tanggung jawab, serta keterbukaan dalam transaksi; ekonomi kemanusiaan (insaniyyah) melalui sikap saling membantu antar pelaku usaha, pelayanan yang baik kepada konsumen, serta kepedulian terhadap kebutuhan masyarakat; dan ekonomi moderat (wasathiyyah) melalui penetapan harga yang wajar, pengambilan keuntungan secara proporsional, serta keseimbangan antara kepentingan usaha dan kepentingan konsumen. Meskipun demikian, sebagian pelaku usaha masih memiliki keterbatasan dalam memahami konsep nilai-nilai ekonomi Islam secara teoretis sehingga penerapannya lebih banyak didasarkan pada pengalaman berdagang dan nilai-nilai yang berkembang di lingkungan usaha.