Pendahuluan: Perdarahan merupakan salah satu penyebab utama kematian yang dapat dicegah pada korban kecelakaan lalu lintas apabila diberikan pertolongan pertama secara cepat dan tepat. Kemampuan first responders dalam memberikan pertolongan pertama dipengaruhi oleh tingkat pengetahuan yang dimiliki. Penelitian ini bertujuan menganalisis hubungan antara tingkat pengetahuan first responders tentang perdarahan dengan kemampuan memberikan pertolongan pertama pada korban kecelakaan lalu lintas di Jember. Metode: Penelitian ini menggunakan desain kuantitatif analitik observasional dengan pendekatan cross – sectional. Sampel penelitian berjumlah 52 first responders yang dipilih menggunakan teknik purposive sampling. Data dikumpulkan menggunakan kuesioner pengetahuan dan lembar checklist simulasi kemampuan pertolongan pertama. Analisis data dilakukan secara univariat dan bivariat menggunakan uji korelasi Spearman's rho dengan tingkat signifikansi α = 0,05. Hasil: Sebagian besar first responders memiliki tingkat pengetahuan tentang perdarahan dalam kategori cukup (63,5%) dan kemampuan memberikan pertolongan pertama dalam kategori cukup (61,5%). Hasil uji Spearman's rho menunjukkan bahwa tingkat pengetahuan first responders tentang perdarahan di Gumitir, Jember berhubungan positif dengan kemampuan memberikan pertolongan pertama dengan hubungan yang signifikan, kuat, dan searah (p < 0,001; rₛ = 0,763), sehingga hipotesis penelitian diterima. Diskusi: Tingkat pengetahuan first responders yang lebih baik berkaitan dengan kemampuan memberikan pertolongan pertama yang lebih baik. Temuan ini menunjukkan bahwa pengetahuan merupakan landasan penting dalam pembentukan kemampuan first responders, sehingga peningkatan pengetahuan diperlukan untuk mendukung kemampuan dalam memberikan pertolongan pertama yang tepat.